DWD-1 تشخیص دهنده ماوراء بنفش (دو طول موج دو پرتو با عملکرد بالا) پردازش داده های داخلی

محدوده طول موج: 254 نانومتر، 280 نانومتر (تشخیص همزمان) ، و همچنین دو طول موج اختیاری بین خطوط طیف 254 نانومتر، 280 نانومتر-400 نانومتر به طور همزمان تشخیص داده می شود.

ویژگی های ابزار DWD-1

اندازه گیری طول موج دوگانه پروتئین 280nm/254nm:

مولکول های پروتئین حاوی اسید های آمینی آروماتیک مانند تیروزین و تراسین هستند. آنها دارای ویژگی جذب نور ماوراء بنفش هستند، اوج جذب آن در طول موج 280 نانومتر است، و مقدار تراکم نوری جذب در این طول موج متناسب با غلظت آن است، بنابراین می تواند به عنوان یک اساس برای کیفیت و اندازه گیری کمی پروتئین، به همین دلیل، جذب ماوراء بنفش در 280 نانومتر معمولا برای نظارت مداوم بر غلظت پروتئین در سیستم تجزیه و تحلیل استفاده می شود. با این حال، از آنجا که میزان تیروسین و تراسین در پروتئین های مختلف متفاوت است، برای تعیین دقیق مقدار، باید محصولات خالص پروتئین مورد اندازه گیری به عنوان استاندارد برای مقایسه یا در حال حاضر ضریب خاموشی آن را به عنوان مرجع شناخته شود. علاوه بر این، بسیاری از مواد غیر پروتئینی نیز در طول موج 280 نانومتر دارای ظرفیت جذب معین هستند که ممکن است اختلال ایجاد کنند. تاثیر آن به ویژه در اسید های نوکلئویی (پورین و پیریسین) شدیدتر است. جذب در 280 نانومتر 10 برابر (در هر گرم) قوی تر از پروتئین است، اما اسید نوکلیکی در 254 نانومتر قوی تر جذب می شود و اوج جذب آن در نزدیکی 254 نانومتر است. ضریب خاموشی اسید نوکلیکی در 254 نانومتر دو برابر 280 نانومتر است.

در مقابل، جذب ماوراء بنفش 280 نانومتر بیشتر از جذب 254 نانومتر است.

معمولا：

نسبت جذب نور پروتئین خالص: A280/A254 1.8

نسبت جذب نور اسید هسته ای خالص: A280/A254 0.5

بنابراین هنگامی که اسید نوکلیکی همزمان در محلول پروتئین وجود دارد (اکثر سیستم های زیستی این طور است)، باید OD254nm و OD280nm را همزمان اندازه گیری کنید. سپس بر اساس نسبت جذب دو طول موج، میزان واقعی پروتئین با استفاده از فرمول های تجربی برای حذف تاثیر اسید نوکلیکی اصلاح می شود.

غلظت پروتئین: 1.45×A280-0.74×A254 (mg/ml)

این فرمول تجربی با استفاده از مجموعه ای از داده های اندازه گیری شده توسط مخلوط پروتئین (مخمر انولازاز) و اسید نوکلیکی (مخمر نوکلیک اسید) با نسبت های مختلف غلظت شناخته شده ایجاد شده است.